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一些特殊组织的RNA提取
浏览次数:163发布日期:2019-12-06

1、纤维组织
心脏/骨骼肌等纤维组织提取RNA的关键在于彻底破碎组织。这些组织细胞密度低,单位重量的组织RNA的含量就少,建议用尽可能多的起始量。使用TRNzol法可以提取纤维组织终RNA,由于纤维组织终RNA含量较少,可按照增加的起始量成比例增加TRNzol的用量,并在液氮中将组织彻底磨碎,同时适当减少溶解RNA的溶液体积。

2、核酸/RNase含量高的组织
脾、胸腺、胰脏等组织的核酸和核酸酶含量很高,可以在液氮中碾磨组织,再快速匀浆。如果裂解液太粘稠(因为核酸含量高的缘故),酚/lv仿抽提不能有效分层,可以加入更多裂解液以解决此类问题。如果加入乙醇后马上有白色沉淀形成则表明有DNA污染,可以在核酸溶解后用酸性酚/lv仿再次抽提,去除DNA污染。

3、蛋白/脂肪含量高的组织
动物的脑和某些特殊的植物组织中,脂肪或者蛋白的含量很高,可以采用TRNzol来提取此类样品中的RNA。在该提取过程中,用lv仿抽提后,如上清仍含白色絮状物,必须用lv仿再次对上清进行抽提。使用TRNzol提取脂肪含量高的组织中RNA时,使用lv仿抽提后会分成油滴、水相(含RNA)、DNA中间层、有机相四层,应用移液管小心吸取水相液体,避免吸到油滴层和DNA层。

4、植物组织和真菌组织
植物组织和真菌组织比动物组织更为复杂,因此为了避免出现内源酶作用使 RNA降解的现象,一般选择在液氮条件下对植物或者真菌材料进行碾磨。如果降解问题不能解决,基本上是由于样品中的内含杂质导致。许多植物和真菌中的内含杂质如多糖、多酚等都会残留,因为这些杂质分子与RNA有一些相似性,可以与RNA同时沉淀或者吸附,因此在植物和真菌组织的RNA提取过程中,需要用一些特别的步骤或者特别的试剂(RNAplant)来去除多糖多酚等杂质的干扰和污染。

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