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如何运用豚鼠ELISA试剂盒可将优点放到Z大
浏览次数:53发布日期:2019-10-30

谈到ELISA的优点,实验操作者们可以随口说出。也正是因此,使得ELISA试剂盒在实验室中得到广泛的应用范围。但是,实验结果的影响受到多方面因素。而试剂盒产品的选择也很重要,甚至完全体现不出ELISA实验的意义与优点。那么如何运用豚鼠ELISA试剂盒可将优点放到zui大呢?且听上海丰寿为您道来……

 

一、论洗涤的重要性
1. ELISAzui后一次洗涤一定要彻底!这一过程不是是反应聚,但却是决定实验成败的关键!在ELISA测定的反应过程中应尽量避免非特异性吸附,应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。洗涤如不彻底,特别在zui后一次,如有酶结合物的非特异性吸附,将使空白值升高。另外,在间接法中如血清标本内的非特异性IgG吸附在固相上而未被洗净,也将与酶标抗体作用而产生干扰。

 

2. 洗板方法的选择
① 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
② 手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟,根据需要,重复此过程数次。

 

阴性和空白值高有几种可能:
① 酶标抗体浓度过高
② 显色时间太久,显色温度过高(可以试一下室温)
③ 板条封闭不完全
④ 板条吸附性太强,造成本底过高

 

在没有洗板机的情况下,手洗需要注意几点:
① 一定要甩液,垂直和斜甩都不要紧,只要能保证一次将孔中的液体甩尽就好了。
② 选用的拍板纸不起碎屑的就可以了(防止到孔中影响结果测定)。
③ 洗板时每次zui好用洗液浸泡1-2min,共洗5次就差不多了。

 

丰寿建议:拍板时可以注意使用腕部的力量,而且不需要用太大的力气。

 

3. 洗涤参数
洗涤量:自动洗板机会分配洗涤液。如果您之前遭遇过高背景,那么不要犹豫,将洗涤量调为高,zui好是比包被体积更高。太少的洗涤液会让一部分分析表面洗涤不到,从而明显增加背景。所有反应孔的洗涤量必须相同。ELISA板的制造商通常会在试剂盒的使用手册中列出包被量。行业中通常使用的包被量是200 μl。

 

如果您你的试剂盒也是这样,那么制造商可能会建议使用300 μl洗涤液进行洗涤,以便清洁整个反应孔的壁。一般来说,洗涤量越高,则孵育步骤残留的抗体或抗原量就越少。

 

4. 清洗液
一般采用0.01Mol/L pH 7.2 PBS吐温缓冲液。吐温是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯,为非离子型的表面张力物质,常做助溶剂。吐温的编号依聚合山梨醇所结合的脂肪酸种类不同而定。吐温20是结合月桂酸、吐温40是结合棕榈酸、吐温60是结合硬脂酸,吐温80是结合油酸等。通常用吐温20加入缓冲液内做为湿润剂,以减少非特异性吸附。也可在PBS缓冲液中加入1%牛血清白蛋白(或10%小牛血清或卵清蛋白),特别在抗原包被以后,以牛血清白蛋白缓冲液再包被一次,而占据孔内剩下位置,这样来减少非特异性反应。    
    
二、ELISA的反应时间
抗原与抗体、抗体与酶标抗体反应一般在37℃ 2h~3h达到高峰。时间太短,敏感性下降,时间太长,吸附的抗原或复合物(在这个温度下)可能脱落。 

 

ELISA是用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗体的微孔中依次加入标本或者标准品、生物素化的抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物显色。底物在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品浓度呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定OD值,计算样品浓度。 

 

上海丰寿公司向广大用户提供产品的同时,始终将客户服务和放在比产品销售更重要的位置上,公司聘请了专职人员,为客户提供豚鼠ELISA试剂盒专业性、个性化的技术服务。

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