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关于抗原修复有哪些具体的方法
浏览次数:131发布日期:2019-07-17

   至今为止,抗原修复有许多种方法,在这些方法中,有的是根据抗体的要求来进行,有的是根据抗原的表达程度来进行,我们则对每种病例每项检测,都要求必须进行抗原修复,以达到抗原全面表达的zui佳状态。以下是上海丰寿生物总结出来的具体抗原修复方法。

(1)物理化学试剂抗原修复法。

1. 真空负压抗原修复法:

① 切片脱蜡至水。
②0.3%H2O2甲醇真空负压处理5分钟。
③自来水洗,蒸馏水洗。
④0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH6.0),真空负压干燥箱预先调至95℃,真空负压处理10分钟。
⑤待修复注降至室温的一,PBS洗3次,随后按选好的免疫组化染色方法进行染色。

2.微波辐射抗原修复法:

①切片脱蜡至水。
②0.3%H2O2甲醇处理10分钟。
③自来水洗,蒸馏水洗。
④ 0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH6.0),于微波炉内微波辐射10分钟,如检测Er和Pr则需要20辐射分钟左右。
⑤待修复液降至室温后,PBS洗3次,随后按选好的免疫组织化学的染色方法进行染色。

3.高压抗原修复法:

①切片脱蜡至水。
②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。
③自来水洗,蒸馏水洗。
④切片放入抗原修复液中,边同容器放入高压锅中加热至沸腾。盖上压力阀至喷汽后持续1-4分钟。
⑤待修复液恢复至室温后,PBS洗3次,随后按选好的免疫组织化学染色方法进行染色。

4.隔水热抗原修复法:

①切片脱蜡至水。
②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。
③自来水洗,蒸馏水洗。
④切片放入0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH0.6)中,边同容器一起放入水溶锅中加热,其间应不断用温度计测其温度,待抗原修复液的温度达到有效温度后(92℃↑)。即开始计时,持续40分钟。
⑤待抗原修复液恢复至室温后,PBS洗3次,随后按选定好的免疫组化染色方法进行染色。

5.电炉加热抗原修复法:

①切片脱蜡至水。
②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。
③自来水洗,蒸馏水洗。
④ 将切片放入抗原修复液中于电炉上加热,不时用温度计测量温度,当达92℃后,即可拔离电源,当温度低于92℃时,再插上电源,如此反复持续至10分钟左右。
⑤待抗原修复液降至室温后,PBS洗3次,随后按选定的免疫组化染色方法进行染色。

(2)对各种抗原修复方法的评价。

1.真空负压抗原修复法:
  这是一种操作简单,效果特佳,温度恒定,能一次性处理大量切片的方法。该法的zui大的特点有四:一是各物质的分子在失重的情况下四处飘游,增加各分子间的碰撞机会;二是有恒定的温度,既能使甲醛固定的蛋白发生变性,又不需要使抗原修复液达到沸腾,不会导致切片因抗原修复液的沸腾而离开载片,保证了染色的成功率,减少了因掉片而反复制片的麻烦,保证了病理报告的及时发生,为病人争取更多的时间;三是不受条件限制,不管是金属性的不是非金属的都可以进行操作;四是可以一次性制作大批的切片。

2.微波辐射抗原修复法:
开元棋牌APP  该法与上法相比,从实验结果看,都不分上下。它是利用微波每秒以24亿5千万次的快速运动产生瞬间热。当然,光靠微波的作用是不够的,还必须依靠热的作用,方能达到目的。应用微波辐射,它有双重作用,微波辐射可以使各物质分子作极性运动。促进形成的醛键断裂开。分子间运动所产生的瞬间热,当达到有效的温度后,就可导致甲醛固定后的蛋白的变性。该法的特点是:产热迅速,容易操作,也容易引起抗原修复液的沸腾,使用微波炉时禁止使用金属性的器皿,以防引起失火或爆炸。

3.高压抗原修复法:
  该法高压和高热来促进醛键的断裂,当加热至开锅,加上高压阀后,汽体喷出,此时的温度已达121℃左右。该法被应用于一些较难修复的抗原,经多次实验认为,该法效果不错。

4.隔水热抗原修复法:
开元棋牌APP  该法应用隔水热方法,效果不及前面三种方法,它需要较长时间的热的作用,在早期应用于Er和Pr染色的抗原修复时,我们的修复时间为40分钟,如果达不到这时间,效果将不理想。

5.电炉加热抗原修复法:
  该法是在没有上述的设备时才选用的一种方法,当然效果是zui差的,因为它只是单靠热的作用,这是远远不够的,另外,电炉加热必须常用温度计来测量温度,对其温度不好控制,有时需要多次关闭电源来维持所需的温度。

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