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ELISA技术讲座的五大重要点
浏览次数:224发布日期:2019-05-06

已经普遍到数大学实验室的ELISA技术,有着重复性稳定及吸附性能好等特点。今天上海丰寿给大家带来了相关实验讲座,ELISA试剂盒的五大重要点分析。
 

1. 灵敏度的要求
根据我公司技术人员的分析:如果待测样本中目标蛋白的浓度比较高,则对灵敏度要求相对小一些。如果待测样本中目标蛋白的浓度比较低,则必须考虑灵敏度的问题。试剂盒曲线上的zui小浓度是比较准确的,低于这个值因为与曲线是个“S”型结构有关,所以结果是有偏差的,是一种估算。再加上实验误差,所以达不到理想的效果。建议选择试剂盒时,应该看曲线上zui小的浓度值,而不是试剂盒上写的灵敏度。
 

2. 标本复查
ELISA手工检测过程复杂,影响因素较多,即使室内质控在控,也可能因孔间差异而造成结果的差异,因此加大复查力度是保证结果准确性的可靠方法,可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。
3. 灰区的设置
通常情况下,ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来报告结果,两者间有一条分界线被称为“阳性判断值”(cut-off value,CO值),这是定性免疫测定结果报告的依据。
    
4. 测试过程请注意:
① 建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。
② 试剂盒保质期内使用,不同批号的试剂不得混用。
③ 实验严格按照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
④ 酶标包被板开封后如未用完,应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
 

5. 常用的表示结果方法
① 定性测定
② 半定量测定,结果一般以滴度表示。
③ 定量测定,即用已知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定,绘制标准曲线,结果以量或单位表示。在ELISA定量检测中每一块反应板都必须绘制相应的标准曲线。

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