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培养基如何消除组织培养的污染?
浏览次数:215发布日期:2019-04-28

培养基是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。培养基一类型细胞没有固定的培养条件。然而在开始进行新的细胞培养时,需要消除组织培养的污染,其步骤如下:

① 在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。

② 分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择抗生素加入到每一个孔中。

③ 每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。

④ 确定抗生素毒性水平后,使用低于毒性浓度2-3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2-3代。

⑤ 在无抗生素的培养基中培养细胞一代。

⑥ 重复步骤4。

⑦ 在无抗生素的培养基中培养4-6代,确定污染是否以已被消除。

在进行新的细胞培养时,必须先消除组织培养的污染, 这样才不会影响实验的效果。

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